Dlx2在胚胎間充質細胞成骨分化中的作用

旦壁 醫堂 堡墓 2 3卷第 1 期B e i i i n g J o u rna l o f D l x 2在胚胎間充質細胞成骨分化 中的作用 鄭 穎范志朋 【 摘要】 目的研究 D i s t a l — l e s s h o m e o b o x 2 ( D l x 2 ) 在胚胎間充質細胞成骨分化中的作用。方法 B m p 4誘導 小鼠胚胎間充質細胞系 C 3 H1 0 T 1 ／ 2細胞體外成骨分化。逆轉錄病毒轉染構建過表達及基因敲除的 D l x 2細胞穩定 轉染細胞 ， 進行 D l x 2獲得性及喪失性功能研究。堿性磷酸酶活性實驗檢測成骨早期分化指標． 堿性磷酸酶活性， 實 時熒光定量反轉錄 P C R( r e a l t i me r e v e r s e t r a n s c ri p t i o n P C R， q R T - P C R) 檢測成骨分化相關基 因． S p 7轉錄因子、 堿性 磷酸酶和骨鈣素的表達。結果結果顯示過表達 D l x 2明顯增強胚胎間充質細胞 C 3 H1 0 T 1 ／ 2的堿性磷酸酶活性。 q R T — P C R結果顯示過表達 D l x 2明顯促進 S p 7轉錄因子、 堿性磷酸酶和骨鈣素的表達。基因敲除 D l x 2明顯抑制 C 3 H1 0 T 1 ／ 2細胞的堿性磷酸酶活性 ， q R T — P C R結果顯示基因敲除 D l x 2明顯抑制 S p 7轉錄因子、 堿性磷酸酶和骨鈣 素的表達。結論D l x 2具有促進胚胎間充質細胞體外成骨分化的功能。 【 關鍵詞】 D l x 2 ； 胚胎 ； 間充質細胞 ； 成骨分化 【 中圖號】 R 3 2 1 ． 5 1 【 文獻標識碼】 A【 文章編號】 1 0 0 6 - 6 7 3 X ( 2 0 1 5 ) 0 1 - 0 0 2 5 - 0 4 T h e r o l e o f Di s t a l - l e s s h o me o b o x 2 i n t h e o s t e o g e n i c d i ffe r e n tia t i o n o f e mb r y o n i c m e s e n c h y ma l c e H s Z HE NG Y i n g， F A N Z h i - p e n g ． C a p i t a l Me d i c a l U n i v e ~ i t y S c h o o l o f S t o m a t o l o g y ，B e n g K e y L a b o r a t o r y of T o o t h R e g e n e r a t i o n a n d F u n c t i o n R e c o n s t r u c t io n ， B e r i n g 1 0 0 0 5 0 ，C h i n a 【 A b s t r a c t 】 O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e r o l e o f D i s t a l — l e s s h o m e o b o x 2( D l x 2 )i n t h e o s t e o g e n i c d i ff e r e n t i a t i o n p o t e n t i al o f e mb r y o n i c me s e n c h y ma l c e l l s ． M e t ho d s Smp 4 w a s u s e d t o i n d u c e t h e o s t e o g e n i c d i f f e r e n t i a t i o n o f mo u s e e mb ryo n i c me s e n c h y mal c e l l l i n e - C 3 H1 0 T1 ／ 2 ．T h e s t a b l e c e l l a n d o v e r - e x p r e s s Dl x 2 we r e e s t a b l i s h e d b y r e t r o v i r a l F l a g - Dl x 2 f o r Ga i n — o f - f u n c t i o n s t u d y ． Re t r o v i r al Dlx 2 s h R NA wa s u s e d t o e s t ab l i s h t h e s t ab l e c e l l a n d k n o c k · d o wn o f D l x 2 f o r L o s s — o f - f u n c t i o n s t u d y ． T h e e a r l y mark e r o f o s t e o g e n i c d i f f e r e n t i a t i o n — Al p a c t i v i t y wa s d e t e c t e d b y alk ali n e p h o s p h a t a s e ( A l p )a c t i v i t y a s s a y ．R e al t i m e R T - P C R w a s a p p l i e d t o e x a mi n e t h e o s t e o g e n e s i s r e l a t e d g e n e s e x p r e s s i o n s ， S p 7 t r a n s c ri p t f a c t o r( o s t e r i x ， O s x ) ，A l p a n d o s t e o c a l c i n( O c n ) ．R e s u l t s O v e r — e x p r e s s i o n o f D l x 2 p r o mo t e d t h e A l p a c t i v i t y and t h e e x p r e s s i o n s o f OS X．Al p a n d Oc n i n C 3 H1 0 T1 ／ 2 c e l l s ． K n o c k ． d o w n o f Dl x 2 i n h i b i t e d t h e A l p a c t i v i t y an d t h e e x p r e s s i o n s o f Os x ，A l p a n d O c n i n C 3 H1 0 T 1 ／ 2 c e U s ．Co n c l u s i o n D l x 2 e n h a n c e d o s t e o g e n i c d i f f e r e n t i a t i o n p o t e n t i al o f e mb ryo n i